雙水相萃取尿酸酶和磷酸甘油氧化酶.pdf

1、雙水相萃取技術是一種利用物質在兩相間選擇性分配的分離純化技術，其原理與水一有機相萃取原理相似。雙水相體系是指高聚物之間或高聚物與無機鹽之間以適當的濃度溶解后形成互不相溶的兩相或多相體系。該體系含水量高，蛋白在其中不易變形；表面張力低，有助于強化相間的質量傳遞；分相時間短，易于放大和連續操作，萃取環境溫和，生物相容性好等，考慮到雙水相萃取技術的以上諸多優勢，因此本文就采用了雙水相萃取技術分離純化尿酸酶和磷酸甘油氧化酶，建立了適當的雙水相體

2、系，并對影響萃取效果的各種因素進行了研究。同時對萃取后，酶的進一步分離純化和鑒定作了相關研究。主要研究結果如下： 1.選用PEG和硫酸銨作為雙水相體系的組成部分，分別用三種分子量的PEG(即PEG400，PEG600，PEG2Q00)與硫酸銨建立起三種雙水相體系。并確定了組成濃度的范圍。 2.利用三種雙水相體系萃取分離發酵后的菌體破碎液中的尿酸酶，確定了萃取尿酸酶的最佳PEG分子量為2000。研究了萃取體系中各種因素對尿

3、酸酶萃取的影響，確立了萃取尿酸的最佳條件。當PEG2000為25％，硫酸銨為9％，PH=7.5，NaC12％為，粗酶量為5％時，萃取后的尿酸酶的純化倍數達到了10，回收率約為90％。根據SDS-PAGE檢測，得出萃取后的雜蛋白明顯少于萃取前。并采用DEAE陰離子交換層析對雙水相萃取后的尿酸酶進一步純化，通過SDS-PAGE進行鑒定，還原和非還原均得到一條帶。 3.利用雙水相體系萃取發酵中的磷酸甘油氧化酶，確定萃取GPO的最佳PE